干货！HJ 998-2018土壤挥发酚检测实操！

土壤中的挥发酚（volatile phenolic compounds, VPCs）是指在特定条件下可以从土壤和沉积物中提取并能随水蒸汽蒸馏出并与4-氨基安替比林反应生成有色化合物的挥发性酚类化合物。这些物质主要来源于石油化工行业、煤气炼制等工业活动，以及植物残体和枯枝落叶的分解和植物根系分泌物。人类生产活动产生的工业废水、农业排水和城市污水排放之后，含挥发酚的污水通过渗透、径流等方式进入土壤，对环境和生物健康造成危害。为了保护生态环境，保障人体健康，规范生态环境检测工作，2018年，生态环境部发布了相关检测标准：HJ 998-2018《土壤和沉积物 挥发酚的测定 4-氨基安替比林分光光度法》。

一、方法原理
用碱性溶液提取土壤和沉积物中的酚类化合物，提取液在酸性条件下蒸馏，馏出液中的挥发酚在K₃[Fe(CN)₆]催化剂存在的碱性溶液中与4-氨基安替比林反应生成橙红色的吲哚酚安替比林，于波长510nm处测量吸光度，在一定浓度范围内，挥发酚含量与吸光度值成正比。

二、试剂材料

三、样品制备
采样前，向每个带有编号的30mL样品瓶内注入10.0mL硫酸铜溶液，准确称量并记录每个样品瓶的重量（含瓶盖，精确至0.1g）。采样时，将样品瓶填满并快速清除掉样品瓶螺纹及外表面上黏附的样品，密封样品瓶。每个点位应至少采集2份样品。采集后的样品应置于4℃以下冷藏保存，保存期3d。分析时，将样品瓶内所有样品取出置于广口聚乙烯瓶中，并用10mL氢氧化钠溶液清洗样品瓶，将清洗液倒入聚乙烯瓶中，再重复清洗2次，随后加入260mL氧化钠溶液，拧紧螺旋盖，水平振荡10min，或用清洗式超声波仪超声10min。若采用冲击式超声波仪，聚乙烯瓶可不加盖，超声10min。样品振荡或超声后，静置5min，取250mL上清液移入500mL全玻璃蒸馏器中，加入数滴甲基橙指示液, 用磷酸调节pH至试样显橙红色( pH≤4）, 再加入5g五水硫酸铜，加 25 mL 水，加数粒玻璃珠以防暴沸。连接冷凝器, 加热蒸馏, 蒸馏过程中应调整加热温度，控制蒸馏速率不大于 7mL/ min, 收集馏出液250mL待测。

四、分析测量
在具塞磨口玻璃比色管中加入系列挥发酚标准溶液，稀释后加入0.5mL缓冲溶液，混匀，再加入1.0mL 4-氨基安替比林溶液，混匀，最后加入1.0mL K₃[Fe(CN)₆]溶液，充分混匀后，密塞（如图1），放置10 min。用光程为10 mm比色皿，以水为参比，在30min内于510nm波长处测定吸光度值。以各标准系列溶液中的酚含量（ug）为横坐标，以其对应的扣除零浓度点吸光度值后的净吸光度值为纵坐标，建立标准曲线（如图2）。

五、经验总结
1. 苯酚易氧化，样品和挥发酚标准溶液应冷藏、避光、密封保存。
2. 超声提取前应将样品溶液重复摇晃均匀，超声时间不得小于10min。
3. 若提取液当天不能分析，应冷藏密封保存，最多不超过7天。
4. 苯酚沸点为182℃，蒸馏时避免温度过低，且蒸馏速率应控制在不大于7mL/min。